Servicio Universitario de Microscopía

Instalaciones y Equipamiento

Edificio SACE :

Aplicaciones disponibles

MICROSCOPIA ELECTRONICA DE TRANSMISIÓN

La microscopia electrónica de transmisión (MET) aplicada a las ciencias de la vida permite estudiar a nivel celular y subcelular, citoquímico e immunocitoquímico muestras biológicas, tejidos animales y vegetales, cultivos celulares y bacterianos, virus, estructuras subcelulares, y macromoléculas.
El microscopio electrónico de transmisión es un instrumento que utiliza como fuente de iluminación un haz de electrones que son generados por un filamento de tungsteno cuando este por efecto termoiónico se pone incandescente. Estos electrones son acelerados y dirigidos hacia la muestra mediante lentes electromagnéticas en condiciones de alto vacío.
Con el fin de observar la muestra en el microscopio electrónico de transmisión hay que prepararla previamente según métodos específicos de fijación, inclusión ultramicrotomía, o crioultramicrotomía. La imagen que se obtiene es plana y monocromática (en blanco y negro) y se puede llegar a un límite de resolución de 0.3 nm.


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Prestaciones:

  • Procesado convencional de muestras para microscopia electrónica de transmisión que comprende: Fijación química, deshidratación, e, inclusión en resinas (Epon, Spurr, LR White etc.….) así como la obtención de secciones finas y ultrafinas debidamente contrastadas para observar al microscopio.
  • Procesado de muestras con fijación por congelación para hacer estudios de inmunocitoquímica las técnicas utilizadas son:
  • a)Crioultramicrotomía. Consiste en la realización de cortes ultrafinos por congelación)
  • b)Criosubstitución y PLT Esta técnica consiste en realizar la substitución del agua del material fijado por congelación por otros agentes de inclusión y todo este proceso se hace a baja temperatura
  • La PLT consiste en realizar procesos de inclusión, de materiales fijados químicamente; pero se realiza una reducción progresiva de la temperatura en los pasos de deshidratación , inclusión y polimerización en diferentes resinas
  • Fijación a Alta presión permite la congelación de muestras de 200μm de espesor, sin los artefactos de la fijación química. Con este sistema se pueden observar muestras biológicas e industrial preservando el estado nativo y por tanto la información que se obtiene es real. El equipo que tenemos cuenta con el sistema de transferencia rápida (5sg) para poder realizar estudios correlativos entre microscopia de luz y microcopio confocal o microscopía electrónica de transmisión.
  • Tinción negativa y sombreados con metales pesados de materiales particulados.
  • Técnicas de inmunocitoquímica y otras técnicas especiales.

Equipamiento:

Aplicaciones

  • Estudio ultraestructural de orgánulos, células, tejidos y suspensiones. 
  • Inmunocitoquímica, histoquímica, hibridación in situ entre otros.

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MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO

El microscopio electrónico de barrido (SEM) se utiliza para obtener imágenes de gran resolución de los rasgos topográficos superficiales de los objetos, su fundamento consiste en hacer interaccionar un haz primario de electrones sobre un área del objeto que se pretende estudiar. El haz debe ser muy fino, intenso y estable porque su función es explorar la superficie de la muestra, dando lugar a diversas señales que serán recogidas por diferentes detectores, de señales, y nos darán una información morfológica estructural y microanalítica según el detector que se haya utilizado o interese.Las muestras para ser observadas al microscopio electrónico de barrido deben estar libres de líquidos y además si no son conductoras deber ser recubiertas con material conductor oro o carbón. Una de las características principales de la microscopia electrónica de barrido es la gran versatilidad en las aplicaciones tanto en el campo de las ciencias de materiales como en las ciencias biomédicas.

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Prestaciones

  • Procesamiento de muestras húmedas siguiendo los siguientes pasos: lavado, fijación, secado mediante técnica de punto crítico y recubrimiento del material con oro o carbono
  • Tratamiento de muestra húmedas mediante la tecnología QuantomiX WETSEM Este sistema permite el estudio de muestra húmedas tanto para obtener imágenes como para realizar estudios de microanálisis con electrones de rayos X conservando su estado nativo.
  • Recubrimiento con oro para la observación de imágenes con electrones secundarios de muestras duras no conductivas.
  • Recubrimiento de muestras con carbono si se trata de realizar un estudio microanalítico con electrones de rayos X

Equipamiento

Aplicaciones

  • Estudios de morfología y topografía en general, hasta resoluciones de 4 nm, desde el campo biomédico hasta el de los materiales.
  • Microanálisis elemental: permite conocer los elementos químicos presentes en las diferentes partes de una muestra, en un volumen tan pequeño como un micrómetro cúbico: Line profile, square o maping para ver la distribución de los elementos químicos que tiene la muestra.
  • Observación de materiales aislantes que necesitan recubrimiento con oro o carbón.

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MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO DE EMISIÓN DE CAMPO (FESEM) APREO S Logo FEDER

 

El nuevo FESEM ApreoS posee un sistema de vacío que permite dos modos de trabajo:

  • Modo de alto vacío para la observación de muestras que no se cargan.
  • Modo de bajo vacío para la observación sin metalización previa de muestras aislantes. Alcanza un rango de presión de hasta 500 Pa para asegurar la observación de cualquier tipo de muestra, por muy aislante que sea.

Este equipo posee un cátodo de emisión de campo tipo Schottky combinado con una óptica electrónica de última generación que incorpora al final una lente compuesta maximizando así la resolución, el contraste y permitir el filtrado de los electrones y la carga. Además, incluye el modo deceleración del haz para trabajar con electrones de mínima energía (0.02 kV). La corriente de sonda es variable entre 1 pA y 400 nA lo que asegura un excelente rendimiento en aplicaciones analíticas (EDX, WDX, EBSD).  Este diseño permite alcanzar una resolución de

  • 1.0 nm a 1 kV en Alto Vacío (sin aplicar deceleración del haz)
  • 1.8 nm a 3 kV en Bajo Vacío.

El sistema de detección estándar incluye

  • Detector de secundarios en cámara
  • Dos detectores in lens para información topográfica y por contraste por composición y orientación
  • Detector de secundarios verdaderos para el modo bajo vacío

La información generada por los tres detectores se puede observar de forma simultánea en el monitor del equipo. Adicionalmente, la configuración del equipo incluye:

  • Detector de electrones retrodispersados de estado sólido dividido en varios sectores: 4 concéntricos para seleccionar los electrones por ángulo y 4 (uno concéntrico y tres sectores) para seleccionar los electrones por orientación.
  • Detector STEM para muestras delgadas dividido en varios sectores para seleccionar electrones transmitidos (campo claro), dispersados con bajo ángulo (DF) y dispersados con gran ángulo (HAADF).
  • Detector de electrones retrodispersados de estado sólido analítico (GAD) para optimizar en bajo vacío el trabajo en rayos-X.

El equipo también consta de un detector para microanálisis EDX de EDAX. Además incorpora el software MAPS para la realización de mosaicos y el software MAPS Correlative que permite correlacionar una imagen de gran campo de observación de una muestra obtenida con otro dispositivo óptico con la imagen SEM. 

 

MICROSCOPIA ÓPTICA

La microscopía óptica ha sido utilizada como técnica básica en estudios de morfología general. Actualmente, la Biología Molecular ha dado un gran salto en el estudio de las estructuras a nivel intracelular haciendo que la técnicas de inmunohistoquímica e inmunocitoquímica sean tan relevantes como lo pueden ser las de microscopía electrónica.  

Prestaciones

  • Inclusiones convencionales en parafina de material animal y vegetal.
  • Inclusiones en resinas JB-4, IMPLEX, TENCHOVIT etc.
  • Secciones de material incluido en parafina y plástico.
  • Tinciones convencionales y especiales :Hematoxilina y Eosina, tricrómico, rojo congo entre otras.
  • Realización de cortes por congelación en Crióstato.
  • Procesamiento de materiales no descalcificados: huesos., dientes etc. Las muestras deben ser tratadas partiendo de una fijación, deshidratación e inclusión en resinas epoxi o similar calidad. La inclusión determinará en gran medida la calidad de las secciones que se realizarán posteriormente.
  • Realización de secciones de 0,3 mm. de grosor con sierra diamantada EXAKT para muestras anatómicas, dientes sin descalcificar y con implantes de materiales como titanio.

Equipamiento

  • Microscópio Nikon Eclipse 90i: Equipado con óptica de fluorita y cámara digital para captación de imagen. Está dotado para trabajar con todas las técnicas de observación de luz visible y epifluorescencia. Logo FEDER
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  • Criostato LEICA CM 3050S. Permite realizar cortes por congelación ( -25ºC) de muestras no fijadas previamente y para tejidos fijados las temperaturas que se precisan son superiores (alrededor de -10 C).
  • Sierra Banda EXAKT Permite obtener de forma automática secciones de 0,3 mm. de grosor .Es un equipo especializado para este tipo de muestras que dispone de una unidad central corte dotada de un dispositivo de control de precisión con cabezal oscilante.

Estos equipos son utilizados en las áreas de Anatomía y Odontología para realizar estudios histológicos de materiales duros sin descalcificar Da la posibilidad de obtener secciones finas (20µm) en muestras de hueso y odontológicas, incluso con esmalte e implantes duros, que posteriormente pueden ser teñidas con diferentes técnicas histológicas.

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MICROSCOPÍA CONFOCAL

La microscopía de barrido láser confocal permite eliminar la señal de fluorescencia que está fuera de foco de una muestra y la posibilidad de obtener de forma no destructiva secciones ópticas de distintos planos de la muestra. Las secciones ópticas obtenidas contienen la información para poder hacer realizar posteriormente un análisis tridimensional: cuantificación análisis volumétrico de la colocalización, distribución de fluorescencia etc. para la observación de la parte interna de una muestra.

La microscopía confocal permite aumentar la resolución óptica y el contraste de las imágenes, ventajas que son necesarias para los estudios de colocalización.

La microscopía confocal de reflexión es una aplicación donde no es necesario aplicar marcajes fluorescentes, lo que se utiliza es la iluminación reflectada por la muestra. Esta técnica puede ser de gran utilidad para el análisis de superficies.

Célula vista en confocal y con super resolución STED

 

 

Equipamiento

- El Modulo Confocal Espectral esta compuesto por : sistema modulador del haz óptico sintonizable, un diodo azul (405nm), láser de argón (458 nm, 476 nm, 514 nm), láser de Helio-Neón 543 nm, láser naranja 594 nm, láser de Helio-Neón 633 nm.

Está dotado de:

√ Camára digital refrigerada DXM 1200C.

√ Módulo Confocal D-eclipse C1 que tiene los siguiente laseres: diodo azul 408nm, láser de Argón 488nm y láser de Helio-Neón 5433nm

Todos los microscopios confocales tienen programas para captar de imágenes en 3D y en los 3 ejes X,Y,Z así como sistemas sencillos par analizar intensidades de fluorescencia.

APLICACIONES

  • Detección de marcajes immunocitoquímicos mediante anticuerpos marcados con fluorocromos tanto en cultivos celulares como en tejidos histológicos y "whole mount".
  • Hibridación in situ con sondas fluorescentes (FISH).
  • Análisis de células in vivo y a tiempo real mediante marcadores y/o proteínas de fusión fluorescentes (GPF) y derivados.
  • Estudios de colocalización, de internalización y tráfico intracelular.
  • Análisis fisiológico de respuesta de Ca2+.
  • Estudio de interacciones entre proteínas mediante la técnica FRET (fluorescence resonance energy transfer)
  • Estudio de transporte de proteínas mediante la técnica FRAP (fluorescence recovery after photo-bleaching).
  • Posibilidad de trabajar con secciones ópticas tanto horizontales como verticales.. Obtención de imágenes digitales fácilmente exportables y transformables a otros apoyos y soportes.
  • Análisis de células in vivo y en tiempo real mediante marcadores y/o proteínas de fusión fluorescentes.
  • Desarrollo de metodologías para el análisis in vivo de células, estudios fisiológicos y análisis de interacción entre proteínas.

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MICROSCOPIO FUERZA ATÓMICA (AFM)

  • El microscopio de AFM Nano-Observer de la compañía Scientec Ibérica es capaz de medir en modo contacto y tapping, ideal para la caracterización de muestras sólidas, líquidas y biológicas.
  • El equipo de AFM presenta escáner de barrido de hasta 100 micras en XY y 14 micras en Z y cabeza AFM con diseño scanning.
  • Posee un sistema de visualización óptica de la punta y muestra mediante una cámara de video a color conectada al microscopio AFM.  Ofrece una vista útil desde la parte superior para el posicionamiento de la punta/muestra o una vista lateral para facilitar el enfoque de la punta/muestra.
    • Visibilidad de muestra/punta
    • Facilidad de uso
    • Evita dañar la muestra o la punta.
    • Mejor contraste por iluminación lateral
  • El equipo posee sonda Kelvin para la medición del potencial de superficie (HD-KFM).
  • El microscopio AFM presenta la opción de medidas con celda de líquido.
  • El equipo incluye cámara de aislamiento acústico y mesa antivibratoria activa.

APLICACIONES

  • Caracterización de materiales
  • Ciencia de polímeros
  • Caracterización eléctrica
  • Semiconductores
  • Muestras blandas
  • Biológicas

Otros equipamientos

Edificio LAIB

MICROSCOPIO CONFOCAL DE BARRIDO ESPECTRAL CON PLATINA MOTORIZADA SP8 LEICA Logo FEDER

 

Es un microscopio invertido motorizado con módulo Confocal de barrido espectral y AOBS.

Características del equipo:

El microscopio Confocal Leica SP8 está equipado con objetivos secos, de inmersión en aceite, inmersión en agua e inmersión en glicerol. Con esta variedad de objetivos los investigadores pueden realizar imágenes de material in vivo de embriones o trozos de tejido de gran tamaño.

1.Objetivos Secos:

  • PL APO 10X / 0.40 AN
  • PL APO 20X / 0.7 AN

2.Objetivos Inmersión en Aceite

  • PL APO 40X / 1.3 AN
  • PL APO 63X / 1.4 AN

3.Objetivos Inmersión en Glicerol

  • PL APO 63X / 1.3 AN

4.Objetivos de inmersión de Agua

  • 25X / 0.95 AN y WD 2.5 mm

La captación de imágenes en DIC está disponible en todos los objetivos de inmersión. No hay DIC en los objetivos secos.

Láseres

  • 405 nm láser de onda continua
  • 458, 476, 488 , 496 y 514 nm (multilínea láser de argón)
  • 561 nm (DPSS láser amarillo)
  • 633 nm (rojo HeNe láser)

Otras características

  • Sistema de cámara Leica-CCD
  • Tandem escáner con un escáner convencional y otro de alta velocidad de 12 kHz Resonante (capaz de 12.000 líneas por segundo)
  • 2 detectores HyD GaAsP ultrasensibles (30% de eficiencia cuántica)
  • Acústico Optical Beam Splitter (AOBS)
  • Cámara de incubación para trabajar con célula viva con control de CO2 y temperatura

Aplicaciones

  • Imágenes de 5 colores simultánea
  • Imágenes DIC
  • Imágenes time lapse
  • Imágenes en 3 dimensiones
  • Imágenes en 3 dimensiones y 3-D animaciones
  • Exploraciones Lambda-scann
  • FRAP
  • FRET

SISTEMA DE MICROFLUÍDICA PARA MICROSCOPÍA CONFOCAL Logo FEDER

 

CRIOSTATO LEICA ECM3050S

Permite realizar cortes por congelación (-25ºC) de muestras no fijadas previamente y para tejidos fijados, las temperaturas que se precisan

son superiores (alrededor de -10ºC).

DOS ULTRAMICROTOMOS REICHERT

Otros equipamientos

  • Una centrífuga
  • Una estufa
  • Una balanza
  • Un baño de ultrasonido
  • Dos frigoríficos
  • Una máquina de hacer cuchillas para el microtomo
  • Una vitrina extractora de gases con filtro

 MICROSCOPIO ÓPTICO LEICA DM2500 LED 

Microscopio óptico con cámara digital incorporada  para la adquisición de imágenes con las técnicas de campo claro y contraste interferencial (DIC).