Métodos alternativos a la Experimentación Animal

Programa

Programa Teórico

Tema 1. Experimentación animal. Bases éticas y legales de la experimentación con animales. Panorama actual en la Unión Europea y en el resto del mundo.

Tema 2. Alternativas a la experimentación animal. Concepto de métodos alternativos. Clasificación. Organismos nacionales e internacionales sobre métodos alternativos. Validación de métodos. Información en la red.

Tema 3. Técnicas in vitro: cultivos celulares. Biología de las células en cultivo. Equipamiento mínimo y consideraciones prácticas: bases metodológicas. Seguridad biológica. Aplicaciones. Buenas Prácticas de Laboratorio.

Tema 4. Tipos de cultivos celulares (I). Cultivos primarios de explantes de órganos. Técnicas de obtención. Requerimientos básicos. Mantenimiento en el laboratorio.

Tema 5. Tipos de cultivos celulares (II). Líneas celulares. Métodos de inmortalización y transformación celular. Mantenimiento en el laboratorio. Colecciones americana (ATCC) y europea (ECACC).

Tema 6. Conservación de células. Crioconservación. Medios y tampones. Descongelación y puesta a punto de los cultivos.

Tema 7. Estudio de los cultivos. Cinética de crecimiento. Patrones. Morfología. Ciclo celular. Expresión génica. Características bioquímicas. Muerte celular.

Tema 8. Técnicas para el estudio de los cultivos. Microscopía óptica, electrónica, de fluorescencia y confocal. Citometría de flujo. Colorantes vitales. Análisis de imagen. Dicroismo circular. Difracción de rayos X. Microdisección por láser. Analizadores de secuencias y fragmentos de ADN. Preparación de las muestras.

Tema 9. Ensayos con cultivos celulares. Tipos de ensayo: farmacológicos, toxicológicos, inmunológicos. Diseño experimental: consideraciones básicas. Ensayos de citotoxicidad basal y selectiva. Elección de dosis. Ensayos de toxicidad aguda y crónica. Bioindicadores. Evaluación de las alteraciones en el ciclo celular. Tipos de muerte: necrosis y apoptosis. Evaluación de las alteraciones morfológicas, genéticas y bioquímicas por agentes químicos.

Tema 10. Valoración de resultados. Interpretación. Extrapolación. Validación. Complementación con otros métodos: experimentación animal u otras alternativas.

Programa Práctico y de Trabajos Dirigidos

Clases prácticas regladas

Sesión 1. El laboratorio de cultivos de tejidos. Infraestructura básica. Manipulación del material. Normas básicas de seguridad biológica. Lugar Laboratorio de Cultivo de Tejidos (SACE).

Sesión 2. El laboratorio de Biología Molecular. Equipos. Aplicaciones. Lugar: Laboratorio de Biología Molecular (CAID).

Trabajos prácticos dirigidos

Sesión 1. Descongelación de líneas celulares y estudio preliminar del cultivo.

Sesión 2. Mantenimiento in vitro de los cultivos. Operaciones básicas.

Sesión 3. Cultivos en suspensión (I). Preparación de cultivo de eritrocitos para estudio de citotoxicidad por espectrofotometría.

Sesión 4. Cultivos en suspensión (II). Ensayo de citotoxicidad por espectrofotometría con eritrocitos.

Sesión 5. Cultivos en monocapa (I). Subcultivo.

Sesión 6. Cultivos en monocapa (II). Preparación de cultivo e inicio de ensayo de citotoxicidad basal.

Sesión 7. Cultivos en monocapa (III). Evaluación de ensayo de citotoxicidad.

Sesión 8. Cultivos en suspensión (III). Evaluación de la citotoxicidad por citometría de flujo.

Sesión 9. Estudio de los cultivos mediante microscopía (óptica, electrónica, confocal).

Estas prácticas se realizarán en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos y (SAI) y en los laboratorios del Área de Toxicología.

Trabajos dirigidos en aula

Sesión 1. Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL y GCCP).

Sesión 2. Exposición de resultados y debate.

Trabajos dirigidos en aula de informática

Sesión 1. Búsqueda de información en la red: fuentes de información, líneas de investigación, proyectos.

Sesión 2. Orientación de seminario: búsqueda en la red de diferentes tipos de estudios (farmacológicos, inmunológicos, toxicológicos, cáncer, etc.).