Servicio de Cultivo de Tejidos
Unidad de Citometría
Citometría de flujo y separación celular (Sorting)
La citometría de flujo permite permite realizar medidas rápidas en partículas suspensión (células, núcleos, cromosomas…) que fluyen hacia un punto donde se realizan la medida simultánea de diversos parámetros ópticos (dispersión frontal y lateral de la luz y fluorescencia de diferentes longitudes de onda). Algunos equipos permiten además separar físicamente células o partículas identificadas durante el análisis y recuperar en tubos separados subpoblaciones homogéneas que presentan una propiedad específica a partir de una población compuesta por distintos tipos celulares. Se pueden cuantificar las señales correspondientes a la absorción, y la emisión de fluorescencia (propia o adquirida por fluorocromos). Los datos obtenidos son almacenados y analizados con la ayuda de un ordenador y una serie de programas informáticos especialmente diseñados para ello.
Aplicaciones
Sus aplicaciones son muy amplias ya que se estiman directamente diversos parámetros celulares. Además de medir la absorción y dispersión de la luz a diferentes ángulos que permiten aplicaciones particulares (tamaño, complejidad o granularidad) se pueden realizar otras medidas basadas en sondas químicas (fluorocromos) o inmunológicas (anticuerpos monoclonales) acoplados directa o indirectamente a fluorocromos para poner de manifiesto macromolélulas celulares. Se aplica al estudio cualitativo y cuantitativo de constituyentes celulares (ARN, proteínas, cromosomas, mitocondrias, enzimas, receptores…). Se pueden realizar medidas de actividad enzimática, flujo de calcio, potencial de membrana o pH, viabilidad, citotoxicidad, efectos de drogas o antimicrobianos, permitiendo medir propiedades de cientos de células individualmente, en lugar de establecer una media sobre una población completa. El contenido de ADN es uno de los parámetros más analizados. Se trata de un marcador de la ploidia y de la situación de las células en las diferentes fases del ciclo celular, permitiendo asimismo el cálculo del índice de ADN.
El Servicio de Cultivo de Tejidos cuenta con un citómetro de flujo con capacidad para separar físicamente diferentes tipos celulares (Cell Sorter) y siete analizadores, cuyas características son las siguientes:
|
Edificio SACE (Campus de Espinardo) |
Edificio LAIB (Campus de Ciencias de la Salud) |
|---|---|
|
Citómetro de flujo BD mod. FACSCalibur 2 láseres, 4 fluorescencias |
"Cell Sorter" SONY SH800Z (*) 4 láseres, 6 fluorescencias |
|
Citómetro de flujo BD mod. FACSCalibur con módulo HTS 2 láseres, 4 fluorescencias |
Citometro de flujo BD LSR Fortessa X-20 5 láseres, 18 fluorescencias |
|
Citómetro de flujo BD mod. FACSVerse 3 láseres, 8 fluorescencias |
Citómetro de flujo BD mod. FACSCanto 2 láseres, 6 fluorescencias |
|
Citómetro de flujo Beckman Coulter mod. FC500 2 láseres, 4 fluorescencias |
Solicitud y normas de uso
Selección de fluorocromos
(*) "Cell Sorter" (SONY SH800Z): Equipo Financiado por la Fundación Cultural Privada Esteban Romero en 2015.
