3.5.1. Fundamento
La presencia de bacterias patógenas en el agua destinada al consumo humano es un riesgo siempre presente, que se incrementa en las áreas de mayor densidad de la población. La técnica de filtración por membrana (MF) se basa en hacer pasar la muestra de agua problema a través de un filtro de membrana microporosa, en cuya superficie quedan retenidos los microorganismos. Se utilizan membranas que tienen un tamaño de poro de 0.45 micras ya que la mayoría de los microorganismos tienen un tamaño superior (diámetro).
La normativa para abastecimiento y control de calidad de agua potable de consumo público establece como análisis microbiológicos a realizar las determinaciones de: coliformes totales, coliformes fecales, gérmenes totales, estreptococos fecales y clostridios sulfito-reductores. El número de determinaciones se establece para cada tipo de análisis, si este es mínimo, normal o completo.
3.5.2. Material
- Recipiente estéril para toma de muestras
- Sistema de filtración y fuente de vacío
- Membranas de filtración de 0.45 micras de diámetro de poro.
- Pinzas de acero con bordes biselados
- Placas Petri.
- Mechero
- Medio Slanetz y Bartley (Merck 1.05262.0500) para análisis de Enterococos fecales
- Agar Chromocult Coliform (Merck: 1.0426.0100) para análisis de E. coli y Coliformes.
Equipo de filtración
3.4.5. Preparación del medio de cultivo Slanetz y Bartley.
- Pesar 41.5 g/litro de agua
- Esterilizar por calor durante 20 minutos en corriente de vapor
- Enfriar rápidamente
- No autoclavar
- Dispensar en placas. (El medio tiene un color pálido amarillo-marrón, aunque pueden aparecer tintes rojizos)
Medios de cultivo
3.4.6. Preparación del medio de cultivo Chromocult.
- Este medio se emplea para la detección simultánea de coliformes totales y E. coli en agua y alimentos
- Disolver 26.5g/litro de agua calentando en agua hirviendo o en autoclave con corriente de vapor
- Agitar aproximadamente durante 35 min. (Puede quedar turbio pero no tiene efectos significativos)
- No introducir en autoclave.
- Dispensar en placas de petri.
3.4.7. Procedimiento
- Limpiar con alcohol la superficie del portafiltros.
- Colocar un filtro de membrana sobre el soporte con la ayuda de unas pinzas de acero previamente flameadas con alcohol.
- Situar un embudo sobre el soporte hasta que esté fijo.
- Verter la muestra de agua problema en el embudo (100ml) y aplicar el vacío hasta que el líquido se haya filtrado.
- Romper el vacío y extraer el embudo. Con las pinzas flameadas se extrae el filtro del soporte.
- Se coloca el filtro dentro de una placa Petri sobre el medio de cultivo, con la cuadricula hacia arriba, procurando que no se formen burbujas entre la membrana y el medio de cultivo.
- Las placas se llevan a incubar en posición invertida en la estufa: Coliformes totales y E.coli: 24 horas a 37ºC; Estreptococos fecales: 48 horas a 37ºC.
- Colonias características: Las colonias de E. coli son azul oscuro a violeta y los coliformes totales son de color salmón a rojo. Si aparecen colonias azul claro a turquesa o incoloras, puede tratarse de otras bacterias Gram negativas. Para confirmar E. coli puede cubrirse la colonia azul-violeta con una gota del reactivo de Kovacs. Si este reactivo da un color cereza-rojo después de algunos segundos, significa que son colonias indol positivo, que confirma la presencia de E. coli.
- Por otra parte los Estreptococos fecales en el medio Slanetz y Bartley producen colonias de color granate.
- Los resultados se expresan en número de microorganismos/100 ml de agua.
Filtro de mebrana
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3.5. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUAS POR FILTRACIÓN
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